लेख शोध विशे दा हिस्सा ऐ “फली दे रोगजनक ते कीड़े-मकोड़े दे प्रतिरोध च सुधार”, सारे 5 लेख दिक्खो
फंगल पौधें दे रोग नेक्रोसिस स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटियोरम (Lib.) दे बैरी बक्ख-बक्ख मेजबान पौधें गी संक्रमित करने आस्तै इक बहुस्तरीय रणनीति दा उपयोग करदा ऐ । इस अध्ययन च डायमाइन एल-ओर्निथिन, इक गैर-प्रोटीन अमीनो एसिड, जेह् ड़ा होर जरूरी अमीनो एसिड दे संश्लेषण गी उत्तेजित करदा ऐ, दा उपयोग वैकल्पिक प्रबंधन रणनीति दे रूप च पेश करदा ऐ जेह् ड़ा स्यूडोमोनास स्क्लेरोटियोरम दे कारण होने आह् ले सफेद फफूंदी दे प्रति फेसिओलस वल्गेरिस एल दी आणविक, शारीरिक ते जैव रासायनिक प्रतिक्रियाएं गी बधांदा ऐ इन विट्रो प्रयोगें कन्नै पता चलेआ जे एल-ओर्निथिन ने खुराक पर निर्भर तरीके कन्नै एस. एह्दे अलावा एह् ग्रीनहाउस दी स्थिति च सफेद फफूंदी दी गंभीरता गी बी मता घट्ट करी सकदा ऐ। इ’नें गै नेईं, एल-ओर्निथिन ने इलाज कीते गेदे पौधें दी वृद्धि गी उत्तेजित कीता, जेह्दे कन्नै एह् दस्सेआ गेआ ऐ जे एल-ओर्निथिन दी जांच कीती गेदी सांद्रता इलाज कीते गेदे पौधें आस्तै फाइटोटोक्सिक नेईं ही। इसदे अलावा, एल-ओर्निथिन ने गैर-एंजाइमी एंटीऑक्सीडेंट (कुल घुलनशील फिनोलिक ते फ्लेवोनोइड्स) ते एन्जाइमी एंटीऑक्सीडेंट (कैटालेज (CAT), पेरोक्साइडेज (POX), ते पॉलीफेनोल ऑक्सीडेज (PPO)) दी अभिव्यक्ति च वृद्धि कीती, ते त्रै एंटीऑक्सीडेंट कन्नै सरबंधत जीन (PvCAT1, PvSOD, ते PvGR) दी अभिव्यक्ति च वृद्धि कीती। इ’नें गै नेईं, सिलिको विश्लेषण च एस. (PlOAH) गी फंक्शनल विश्लेषण, संरक्षित डोमेन, ते टोपोलॉजी दे संदर्भ च। मजेदार गल्ल एह् ऐ जे आलू दे डेक्स्ट्रोज शोरबा (पीडीबी) माध्यम च एल-ओर्निथिन दे जोड़े जाने कन्नै एस. इसी गै एल-ओर्निथिन दे बहिर्जात प्रयोग कन्नै इलाज कीते गेदे पौधें थमां इकट्ठे कीते गेदे फंगल माइसेलियम च SsOAH जीन दी अभिव्यक्ति च काफी कमी आई ऐ । आखरी च, एल-ओर्निथिन दे प्रयोग कन्नै पीडीबी माध्यम ते संक्रमित पत्तें च आक्सीलिक एसिड दे स्राव च काफी कमी आई ऐ । निष्कर्ष च, एल-ओर्निथिन रेडॉक्स स्थिति गी बनाए रखने दे कन्नै-कन्नै संक्रमित पौधें दी रक्षा प्रतिक्रिया गी बधाने च बी मुक्ख भूमिका निभांदा ऐ । इस अध्ययन दे नतीजे सफेद फफूंदी गी नियंत्रित करने ते बीएं दे उत्पादन ते होर फसलें उप्पर इसदे प्रभाव गी घट्ट करने आस्तै नमें, पर्यावरण अनुकूल तरीकें गी विकसित करने च मदद करी सकदे न।
सफेद फफूंदी, नेक्रोट्रोफिक कवक स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरम (Lib.) दे बैरी दे कारण पैदा होंदी ऐ, इक विनाशकारी, पैदावार घट्ट करने आह्ली बीमारी ऐ जेह्ड़ी वैश्विक बीन (Phaseolus vulgaris L.) उत्पादन आस्तै गंभीर खतरा पैदा करदी ऐ (बोल्टन एट अल., 2006) स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरम नियंत्रण करने च सबनें शा मुश्कल मिट्टी-जनित फंगल पौधें दे रोगजनकें च इक ऐ, जिस च 600 शा मते पौधें दी प्रजातियें दी व्यापक मेजबान श्रृंखला ऐ ते मेजबान ऊतकें गी गैर-विशिष्ट तरीके कन्नै तेजी कन्नै मैसेरेट करने दी क्षमता ऐ (Liang and Rollins, 2018) प्रतिकूल परिस्थितियें च एह् अपने जीवन चक्र दा इक महत्वपूर्ण चरण थमां गुजरदा ऐ , जेह्दे कन्नै मिट्टी च काले, कठोर, बीऽ-रूपी संरचनाएं दे रूप च जां संक्रमित पौधें दे माइसेलियम जां स्टेम पिथ च सफेद, फुल्लै आह्ले विकास दे रूप च लंबे समें तकर सुप्त रौंह्दा ऐ (Schwartz et al., 2005) एस. स्क्लेरोटिया पोशक तत्वें कन्नै समृद्ध ऐ , मिट्टी च लम्मी अवधि तकर रौंह् सकदा ऐ , ते बाद च संक्रमण आस्तै प्राथमिक टीका दे रूप च कम्म करदा ऐ ( Schwartz et al., 2005 ) । अनुकूल परिस्थितियें च स्क्लेरोटिया अंकुरित होंदे न ते हवा च बीजाणु पैदा करदे न जेह्ड़े पौधे दे सब्भै जमीन थमां उप्पर दे हिस्सें गी संक्रमित करी सकदे न , जिंदे च फुल्ल , तना जां फली बी शामल न पर इसदे तकर सीमित नेईं ( Schwartz et al., 2005 )
स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटियोरम अपने मेजबान पौधें गी संक्रमित करने आस्तै इक बहुस्तरीय रणनीति दा उपयोग करदा ऐ , जिस च स्क्लेरोटिया अंकुरण थमां लेइयै लक्षण विकास तकर समन्वयात्मक घटनाएं दी श्रृंखला शामल ऐ । शुरू च एस स्क्लेरोटिओरम मशरूम-रूपी संरचनाएं थमां निलंबित बीजाणु (जि’नेंगी एस्कोस्पोरस आखेआ जंदा ऐ) पैदा करदा ऐ जेह्ड़ा एपोथेसिया नांऽ दे रूप च हवा च होंदा ऐ ते संक्रमित पौधें दे मलबे पर गैर-गतिशील स्क्लेरोटिया च विकसित होंदा ऐ (बोल्टन एट अल., 2006) इसदे बाद कवक पौधे दी कोशिका दी दीवार दे पीएच गी नियंत्रत करने, एन्जाइमिक अपघटन ते ऊतक आक्रमण गी बढ़ावा देने आस्तै, ते मेजबान पौधे दे आक्सीडेटिव फटने गी दबाने आस्तै आक्सीलिक एसिड, इक विषाक्त कारक दा स्राव करदा ऐ एह् अम्लीकरण प्रक्रिया पौधें दी कोशिका दी दीवार गी कमजोर करदी ऐ , जेह्ड़ी फंगल कोशिका दी दीवार गी घट्ट करने आह्ले एन्जाइम (CWDEs) दे सामान्य ते कुशल संचालन आस्तै अनुकूल वातावरण प्रदान करदी ऐ , जिस कन्नै रोगजनक शारीरिक बाधा गी दूर करने ते मेजबान ऊतकें च प्रवेश करने दी अनुमति दिंदा ऐ (मार्सियानो एट अल., 1983) इक बारी घुसपैठ करने दे बाद एस स्क्लेरोटिओरम मते सारे सीडब्ल्यूडीई स्रावित करदा ऐ , जि’यां पॉलीगैलेक्टुरोनेज ते सेल्युलेज , जेह्ड़े संक्रमित ऊतकें च इसदे प्रसार गी सुविधाजनक बनांदे न ते ऊतक दे नेक्रोसिस पैदा करदे न । घाव ते हाइफाल मैट दी प्रगति कन्नै सफेद फफूंदी दे लक्षणीय लक्षण पैदा होंदे न (हेगेडस ते रिमर, 2005) । इसदे अलावा, मेजबान पौधे पैटर्न पन्छानने आह् ले रिसेप्टर्स (PRRs) दे माध्यम कन्नै रोगजनक-संबद्ध आणविक पैटर्न (PAMPs) गी पन्छानदे न , जेह्दे कन्नै संकेत घटनाएं दी श्रृंखला शुरू होंदी ऐ जेह्ड़ी अंततः रक्षा प्रतिक्रियाएं गी सक्रिय करदी ऐ
बमारी नियंत्रण दे दशकें दे प्रयासें दे बावजूद बीन च बी, जि’यां होर व्यावसायिक फसलें च, रोगजनक दे प्रतिरोधक क्षमता, जीवित रौह्ना ते अनुकूलन क्षमता दे कारण, पर्याप्त प्रतिरोधी जर्मप्लाज्म दी कमी बनी दी ऐ इसलेई रोग प्रबंधन बेह्तर चुनौतीपूर्ण ऐ ते इस च इक समेकित, बहुआयामी रणनीति दी लोड़ ऐ जिस च सांस्कृतिक प्रथाएं, जैविक नियंत्रण, ते रसायनिक कवकनाशकें दा संयोजन शामल ऐ (ओ’सुलिवान एट अल., 2021) सफेद फफूंदी दा रसायनिक नियंत्रण सारें शा मता असरदार ऐ की जे कवकनाशक दवाएं गी सही तरीके कन्नै ते सही समें उप्पर लाने पर बीमारी दे फैलाव गी प्रभावी ढंगै कन्नै नियंत्रत करी सकदे न , संक्रमण दी गंभीरता गी घट्ट करी सकदे न ते पैदावार च नुकसान गी घट्ट करी सकदे न लेकन कवकनाशक दवाएं पर मता इस्तेमाल ते मता भरोसा करने कन्नै एस स्क्लेरोटियोरम दे प्रतिरोधी उपभेद पैदा होई सकदे न ते गैर-लक्ष्य जीवें, मिट्टी दी सेह्त, ते पानी दी गुणवत्ता पर नकारात्मक असर पौंदा ऐ (ले कोइंटे एट अल., 2016; सेरेसिनी एट अल., 2024) इसलेई पर्यावरण अनुकूल विकल्पें दी तलाश करना इक बड्डी प्राथमिकता बनी गेई ऐ।
पोलिआमाइन (पीए), जि’यां पुत्रेसिन, स्पर्मिडीन, स्पर्माइन, ते कैडावेरिन, मिट्टी कन्नै होने आह्ले पौधें दे रोगजनकें दे खिलाफ आशाजनक विकल्प दे रूप च कम्म करी सकदे न, जिस कन्नै खतरनाक रसायनिक कवकनाशक दे इस्तेमाल च पूरी चाल्लीं जां आंशिक रूप कन्नै कमी आई सकदी ऐ (नेहेला एट अल., 2024; यी एट अल., 2024) उच्च पौधें च, पीए मते सारे शारीरिक प्रक्रियाएं च शामल होंदे न जिंदे च कोशिका विभाजन, भेदभाव, ते अजैविक ते जैविक तनाव दे प्रतिक्रिया शामल न (किलिनी ते नेहेला, 2020) एह् एंटीऑक्सीडेंट दे रूप च कम्म करी सकदे न, प्रतिक्रियाशील आक्सीजन प्रजातियें (आरओएस) गी स्केवेंज करने च मदद करी सकदे न, रेडॉक्स होमियोस्टेसिस गी बनाए रखने च मदद करी सकदे न (नेहेला ते किलिनी, 2023), रक्षा कन्नै सरबंधत जीन गी प्रेरित करी सकदे न (रोमेरो एट अल., 2018), बक्ख-बक्ख चयापचय मार्गें गी नियंत्रित करी सकदे न (नेहेला ते किलिनी, 2023), अंतर्जात फाइटोहार्मोन (नेहेला ते किलिनी, 2023) गी संतुलित करी सकदे न। 2019), प्रणालीगत अधिग्रहीत प्रतिरोध (एसएआर) स्थापित करदे न, ते पौधे-रोगजनक परस्पर क्रियाएं गी नियंत्रित करदे न (नेहेला ते किलिनी, 2020; असिजा एट अल., 2022; Czerwoniec, 2022)। ध्यान देने आह् ला ऐ जे पौधें दी रक्षा च पीए दे विशिश्ट तंत्र ते भूमिका पौधें दी प्रजातियें , रोगजनकें ते पर्यावरण दी स्थिति दे आधार उप्पर बक्ख-बक्ख न । पौधें च सबनें थमां मती मात्रा च पीए जरूरी पॉलीअमाइन एल-ओर्निथिन (Killiny and Nehela, 2020) थमां जैव संश्लेषण कीता जंदा ऐ ।
एल-ओर्निथिन पौधें दी वृद्धि ते विकास च मती भूमिका निभांदा ऐ । मसाल आस्तै, पिछले अध्ययनें कन्नै पता चलेआ ऐ जे चावल (Oryza sativa) च, ऑर्निथिन नाइट्रोजन रीसाइक्लिंग (Liu et al., 2018), चावल दी पैदावार, गुणवत्ता ते खुशबू (Lu et al., 2020), ते पानी दे तनाव दे प्रतिक्रिया (Yang et al., 2000) कन्नै जुड़े दा होई सकदा ऐ इत्थूं तगर जे एल-ओर्निथिन दे बहिर्जात प्रयोग ने चीनी चुकंदर (बीटा वल्गेरिस) च सूखे सहनशीलता च काफी वृद्धि कीती (हुसैन एट अल., 2019) ते प्याज (एलियम सेपा) (Çavuşoǧlu ते Çavuşoǧlu, 2021) ते काजू (Anacardium occidentale) च नमक दे तनाव गी घट्ट कीता। पौधे (दा रोचा एट अल., 2012)। अजैविक तनाऽ दी रक्षा च एल-ओर्निथिन दी संभावित भूमिका इलाज कीते गेदे पौधें च प्रोलाइन दे संचय च इसदी भागीदारी दे कारण होई सकदी ऐ । मसाल आस्तै, प्रोलाइन चयापचय कन्नै सरबंधत जीन, जि’यां ऑर्निथिन डेल्टा अमीनोट्रांसफरेज़ (डेल्टा-ओएटी) ते प्रोलाइन डिहाइड्रोजनेज (ProDH1 ते ProDH2) जीन, पैह्लें गै गैर-मेजबान स्यूडोमोनास सिरिंज उपभेदें (सेंथिल-कुमार ते... मैसूर, 2012) ऐ। दूई बक्खी, रोगजनक विकास आस्तै फंगल ऑर्निथिन डिकार्बोक्जिलेज (ODC) दी लोड़ होंदी ऐ (Singh et al., 2020) । फ्यूजेरियम ऑक्सीस्पोरम च ओडीसी गी लक्ष्य बनाना। एसपी। मेजबान-प्रेरित जीन साइलेंसिंग (HIGS) दे माध्यम कन्नै lycopersici ने टमाटर दे पौधें दे फ्यूजेरियम विल्ट दे प्रतिरोध च काफी वृद्धि कीती (सिंह एट अल., 2020)। लेकन फाइटोपैथोजेन जनेह् जैविक तनाव दे खिलाफ बहिर्जात ऑर्निथिन दे प्रयोग दी संभावित भूमिका दा ठीक ढंगै कन्नै अध्ययन नेईं कीता गेआ ऐ । एह्दे शा बी मती जरूरी गल्ल एह् ऐ जे रोग प्रतिरोधक क्षमता ते इस कन्नै जुड़ी दी जैव रासायनिक ते शारीरिक घटनाएं पर ऑर्निथिन दे प्रभाव बड्डे पैमाने पर अनजान रेह् न ।
फलियां दे एस स्क्लेरोटियोरम संक्रमण दी जटिलता गी समझना प्रभावी नियंत्रण रणनीति दे विकास आस्तै जरूरी ऐ । इस अध्ययन च असें गी स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटियोरम संक्रमण दे प्रति फलियां दे पौधें दे रक्षा तंत्र ते प्रतिरोध गी बधाने च इक मुक्ख कारक दे रूप च डायमाइन एल-ओर्निथिन दी संभावित भूमिका दी पन्छान करना हा। अस परिकल्पना करदे आं जे संक्रमित पौधें दी रक्षा प्रतिक्रियाएं गी बधाने दे अलावा, एल-ओर्निथिन रेडॉक्स स्थिति गी बनाए रखने च बी मुक्ख भूमिका निभांदा ऐ। अस प्रस्ताव करने आं जे एल-ओर्निथिन दे संभावित प्रभाव एन्जाइमिक ते गैर-एन्जाइमिक एंटीऑक्सीडेंट रक्षा तंत्र दे नियमन ते फंगल रोगजनकता/विषाक्तता कारक ते संबद्ध प्रोटीन कन्नै हस्तक्षेप कन्नै सरबंधत न एल-ओर्निथिन दी एह् दोहरी कार्यक्षमता इसगी सफेद फफूंदी दे प्रभाव गी घट्ट करने ते इस शक्तिशाली फंगल रोगजनक दे प्रति आम फलियां फसलें दे प्रतिरोध गी बधाने आस्तै इक टिकाऊ रणनीति आस्तै इक आशाजनक उम्मीदवार बनांदी ऐ । मौजूदा अध्ययन दे नतीजे सफेद फफूंदी गी नियंत्रित करने ते फलियां उत्पादन उप्पर इसदे प्रभाव गी घट्ट करने आस्तै नमें, पर्यावरण अनुकूल तरीकें दे विकास च मदद करी सकदे न।
इस अध्ययन च आम बीन दी इक संवेदनशील व्यावसायिक किस्म, गीज़ा 3 (Phaseolus vulgaris L. cv. Giza 3) दा प्रयोगात्मक सामग्री दे रूप च इस्तेमाल कीता गेआ। सेहतमंद बीऽ गी फलियां अनुसंधान विभाग, खेतीबाड़ी फसलें अनुसंधान संस्थान (एफसीआरआई), कृषि अनुसंधान केंद्र (एआरसी), मिस्र आसेआ मेहरबानी करियै उपलब्ध करोआया गेआ। पंज बीऽ गी ग्रीनहाउस दी स्थिति च (25 ± 2 डिग्री सेल्सियस, सापेक्ष आर्द्रता 75 ± 1%, 8 घैंटें दी रोशनी/16 घैंटें दा काला) एस. बोआई दे 7-10 दिनें बाद (डीपीएस) बीऽ गी पतला करी दित्ता गेआ तां जे हर बर्तन च इक समान वृद्धि आह्ले दो बीऽ ते त्रै पूरी चाल्लीं फैले दे पत्तें गी गै छोड़ी दित्ता गेआ। सब्भै गमले दे पौधें गी हर दो हफ्ते च इक बारी पानी दित्ता जंदा हा ते दित्ती गेई किस्म आस्तै सिफारिश कीती गेदी दर कन्नै हर म्हीने खाद दित्ता जंदा हा ।
एल-ओर्निथिनडाइआमाइन (जिसी (+)-(S)-2,5-डायमिनोपेन्टानोइक एसिड दे रूप च बी जानेआ जंदा ऐ; सिग्मा-एल्ड्रिच, डार्मस्टैड, जर्मनी) दी 500 मिलीग्राम/लीटर सांद्रता तैयार करने आस्तै, 50 मिलीग्राम गी पैह् ले 100 एमएल बाँझ आसुत पानी च घोल दित्ता गेआ। इसदे बाद स्टॉक घोल गी पतला कीता गेआ ते बाद दे प्रयोगें च इस्तेमाल कीता गेआ। संक्षेप च, एल-ओर्निथिन सांद्रता (12.5, 25, 50, 75, 100, ते 125 मिलिग्राम/लीटर) दी छह श्रृंखलाएं गी विट्रो च परीक्षण कीता गेआ। इसदे अलावा, बाँझ आसुत पानी दा इस्तेमाल नकारात्मक नियंत्रण (मॉक) दे रूप च कीता गेआ ते व्यावसायिक कवकनाशक “रिज़ोलेक्स-टी” 50% गीले पाउडर (टोक्लोफोस-मिथाइल 20% + थिराम 30%; केजेड-कफ्र एल ज़ायत कीटनाशक ते रसायन कंपनी, कफर एल ज़ायत, घरबिया गवर्नमेंट, मिस्र) दा इस्तेमाल सकारात्मक नियंत्रण दे रूप च कीता गेआ। व्यावसायिक कवकनाशक “रिज़ोलेक्स-टी” दा परीक्षण पंज सांद्रता (2, 4, 6, 8 ते 10 मिलिग्राम/लीटर) च विट्रो च कीता गेआ।
सफेद फफूंदी दे ठेठ लक्षण दिक्खने आह्ले आम बीन दे तना ते फली दे नमूने (आक्रमण दर: 10-30%) व्यावसायिक खेतरें थमां इकट्ठे कीते गे । हालांकि संक्रमित पौधें दी मती सारी सामग्री दी पन्छान प्रजाति/किस्म (संवेदनशील व्यावसायिक किस्म गीज़ा 3) दे आधार उप्पर कीती गेई ही, पर दूए, खास करियै मकामी बजारें थमां हासल कीते गेदे, अज्ञात प्रजातियें दे हे। इकट्ठे कीते गेदे संक्रमित समग्गरी गी पैह् ले 0.5% सोडियम हाइपोक्लोराइट घोल कन्नै 3 मिनट तगर सतह उप्पर कीटाणुरहित कीता गेआ हा, फिर बाँझ आसुत पानी कन्नै केईं बारी कुल्ला कीता गेआ हा ते बाँझ फिल्टर पेपर कन्नै सुक्की गेआ तां जे फालतू पानी गी हटाया जाई सकै। इसदे बाद संक्रमित अंगें गी मझाटले ऊतक थमां (सेहतमंद ते संक्रमित ऊतकें दे बिच्च) छोटे-छोटे टुकड़े च कट्टियै आलू दे डेक्स्ट्रोज अगर (पीडीए) माध्यम कन्नै संस्कार कीता गेआ ते 25 ± 2 डिग्री सेल्सियस पर 12 घैंटें दी रोशनी/12 घैंटें दे न्हेरे चक्र कन्नै 5 दिनें तगर इन्क्यूब कीता गेआ तां जे स्क्लेरोटिया दे निर्माण गी उत्तेजित कीता जाई सकै मिश्रित जां दूषित संस्कृतियें थमां फंगल आइसोलेट गी शुद्ध करने आस्तै बी माइसेलियम टिप विधि दा इस्तेमाल कीता गेआ। शुद्ध फंगल आइसोलेट दी पैह् ले थमां गै इसदी सांस्कृतिक रूप-रचना विशेषताएं दे आधार उप्पर पन्छान कीती गेई ही ते इसदे बाद सूक्ष्मदर्शी विशेषताएं दे आधार उप्पर एस. आखरी च, कोच दे पोस्टुलेटें गी पूरा करने आस्तै सब्भै शुद्ध आइसोलेटें दा रोगजनकता आस्तै संवेदनशील आम बीन प्रजाति गीज़ा 3 पर परीक्षण कीता गेआ।
इसदे अलावा, सबनें शा आक्रामक एस. Baturo-Ciesniewska et al., 2017. संक्षेप च, आइसोलेटें गी आलू डेक्स्ट्रोज शोरबा (पीडीबी) च संवर्धित कीता गेआ ते 25 ± 2 डिग्री सेल्सियस पर 5-7 दिनें तगर इन्क्यूब कीता गेआ। इसदे बाद फंगल माइसेलियम गी इकट्ठा करियै पनीर दे कपड़े च छानेआ गेआ, बाँझ पानी कन्नै दो बारी धोया गेआ, ते बाँझ छानने आह् ले कागज कन्नै सुक्खेआ गेआ। जीनोमिक डीएनए गी क्विक-डीएनए TM फंगल/बैक्टीरियल मिनीप्रेप किट (कुरामाए-इज़ियोका, 1997; अटाल्लाह एट अल., 2022, 2024) दा उपयोग करियै अलग कीता गेआ। इसदे बाद आईटीएस आरडीएनए क्षेत्र गी विशिष्ट प्राइमर जोड़ी ITS1/ITS4 (TCCGTAGGTGAACCTGCGG TCCTCCGCTTATTGATATGC; उम्मीद दा आकार: 540 बीपी) ( Baturo-Ciesniewska et al., 2017 ) दा उपयोग करियै प्रवर्धित कीता गेआ। शुद्ध पीसीआर उत्पादें गी अनुक्रमण (बीजिंग आओके डिंगशेंग बायोटेक्नोलॉजी कं, लिमिटेड) लेई पेश कीता गेआ। आईटीएस आरडीएनए अनुक्रमें गी सैंगर अनुक्रमण विधि दा उपयोग करियै द्वि-दिशा अनुक्रमित कीता गेआ। इसदे बाद इकट्ठे कीते गेदे क्वेरी अनुक्रमें दी तुलना जेनबैंक ते नेशनल सेंटर फार बायोटेक्नोलॉजी इन्फॉर्मेशन (एनसीबीआई, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/) च नवीनतम डेटा कन्नै BLASTn सॉफ्टवेयर दा उपयोग करियै कीती गेई। क्वेरी अनुक्रम दी तुलना आणविक विकास आनुवांशिक विश्लेषण पैकेज (MEGA-11; संस्करण 11) च ClustalW दा उपयोग करदे होई एनसीबीआई जेनबैंक (पूरक तालिका S1) च नवीनतम डेटा थमां हासल कीते गेदे 20 होर एस. विकासात्मक विश्लेषण अधिकतम संभावना पद्धति ते सामान्य समें-रिवर्सिबल न्यूक्लियोटाइड प्रतिस्थापन मॉडल (नेई ते कुमार, 2000) दा उपयोग करियै कीता गेआ। जिस बूह्टे च लॉग-संभावना सारें शा मती ऐ उसी दस्सेआ गेआ ऐ। हेरिस्टिक खोज आस्तै शुरूआती बूह्टे दा चयन पड़ोसी-जॉइनिंग (एनजे) बूह्टे (कुमार एट अल., 2024) ते मती थमां मती पारसीमोनी (एमपी) बूह्टे दे बश्कार उच्च लॉग-संभावना आह् ले बूह्टे गी चुनने कन्नै कीता जंदा ऐ। एनजे बूह्टे दा निर्माण सामान्य समें-रिवर्सिबल मॉडल (नेई ते कुमार, 2000) दा उपयोग करियै गणना कीते गेदे जोड़ीवार दूरी मैट्रिक्स दा उपयोग करियै कीता गेआ हा।
एल-ओर्निथिन ते जीवाणुनाशक “रिज़ोलेक्स-टी” दी जीवाणुरोधी गतिविधि गी अगर प्रसार विधि कन्नै विट्रो च निर्धारत कीता गेआ। विधि: एल-ओर्निथिन (500 मिलिग्राम/लीटर) दे स्टॉक घोल दी उचित मात्रा लैओ ते इसगी 10 मिलीलीटर पीडीए पोशक तत्व माध्यम कन्नै पूरी चाल्लीं मिलाइयै क्रमशः 12.5, 25, 50, 75, 100 ते 125 मिलिग्राम/लीटर दी अंतिम सांद्रता आह्ले घोल तैयार करो। नियंत्रण दे रूप च कवकनाशक “रिज़ोलेक्स-टी” (2, 4, 6, 8 ते 10 मिलिग्राम/लीटर) ते बाँझ आसुत पानी दी पंज सांद्रता दा इस्तेमाल कीता गेआ। माध्यम दे ठोस होने दे बाद, स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटियोरम कल्चर दा इक ताजा तैयार माइसेलियम प्लग, 4 मिमी व्यास, पेट्री डिश दे केंद्र च स्थानांतरित कीता गेआ ते 25±2 डिग्री सेल्सियस पर संस्कार कीता गेआ, जिसलै तकर माइसेलियम ने पूरे नियंत्रण पेट्री डिश गी ढक नेईं दित्ता, जिसदे बाद फंगल दी वृद्धि दर्ज कीती गेई। समीकरण 1 दा उपयोग करदे होई एस स्क्लेरोटियोरम दी रेडियल विकास दे प्रतिशत निरोध दी गणना करो:
प्रयोग गी दो बारी दोहराया गेआ हा, जिस च हर नियंत्रण/प्रयोगात्मक समूह आस्तै छह जैविक प्रतिकृतियां ते हर जैविक प्रतिकृति आस्तै पंज गमले (दो पौधे प्रति गमले) होंदे न । हर जैविक प्रतिकृति दा दो बारी (दो तकनीकी प्रतिकृति) विश्लेषण कीता गेआ तां जे प्रयोग दे नतीजें दी सटीकता, विश्वसनीयता ते प्रजनन क्षमता गी सुनिश्चित कीता जाई सकै। इसदे अलावा, आधा-अधिकतम निरोधात्मक सांद्रता (IC50) ते IC99 (Prentice, 1976) दी गणना करने आस्तै प्रोबिट रिग्रेशन विश्लेषण दा उपयोग कीता गेआ।
ग्रीनहाउस दी स्थिति च एल-ओर्निथिन दी क्षमता दा मूल्यांकन करने आस्तै लगातार दो बर्तन प्रयोग कीते गे। संक्षेप च, बर्तनें गी नसबंदी कीती गेई मिट्टी-रेत दी मिट्टी (3:1) कन्नै भरेआ गेआ ते एस. पैह् ला, एस स्क्लेरोटियोरम (आइसोलेट #3) दे सबतूं आक्रामक आइसोलेट गी इक स्क्लेरोटियम गी आधे च कट्टियै, पीडीए पर मुँह थमां हेठ रक्खियै ते 25 डिग्री सेल्सियस पर लगातार न्हेरे (24 घैंटें) च 4 दिनें तगर इन्क्यूब करियै माइसेलियम दी वृद्धि गी उत्तेजित करियै संवर्धित कीता गेआ। इसदे बाद चार 5 मिमी व्यास दे अगर प्लग गी अग्गें दे किनारे थमां लेइयै 100 ग्राम कणक ते चावल दे चोकर (1:1, v/v) दे बाँझ मिश्रण कन्नै टीका कीता गेआ ते सारे फ्लास्कें गी 25 ± 2 डिग्री सेल्सियस पर 12 घैंटें दे प्रकाश/12 घैंटें दे न्हेरे चक्र च 5 दिनें तगर इन्क्यूब कीता गेआ तां जे स्क्लेरोटिया दे निर्माण गी उत्तेजित कीता जाई सकै। मिट्टी पाने शा पैह्ले इकरूपता सुनिश्चित करने आस्तै सब्भै फ्लास्कें दी सामग्री गी पूरी चाल्लीं मिलाया गेआ हा। फिर, हर बर्तन च 100 ग्राम उपनिवेशीकरण चोकर दे मिश्रण गी मिलाया गेआ तां जे रोगजनकें दी लगातार सांद्रता सुनिश्चित कीती जाई सकै। टीकाकृत बर्तनें गी फंगल दी वृद्धि गी सक्रिय करने आस्तै पानी दित्ता गेआ ते 7 दिनें तगर ग्रीनहाउस दी स्थिति च रक्खेआ गेआ।
इसदे बाद हर बर्तन च गीजा 3 किस्म दे पंज बीज बोए गे। एल-ओर्निथिन ते कवकनाशक रिज़ोलेक्स-टी कन्नै इलाज कीते गेदे गमले आस्तै, नसबंदी कीते गेदे बीएं गी पैह्लें दो घैंटें तगर दो यौगिकें दे जलीय घोल च भिगोई दित्ता गेआ हा, जिस च अंतिम IC99 सांद्रता क्रमशः लगभग 250 मिलिग्राम/लीटर ते 50 मिलिग्राम/लीटर होंदी ही, ते फिर बोआई थमां पैह्ले इक घैंटे तगर हवा च सुक्खेआ गेआ हा। दूई बक्खी बीएं गी नकारात्मक नियंत्रण दे तौर उप्पर बाँझ आसुत पानी च भिगोई दित्ता गेआ हा। 10 दिनें दे बाद पैह्ले पानी देने थमां पैह्ले बीऽ गी पतला करी दित्ता जंदा हा, जिस कन्नै हर बर्तन च दो साफ-सुथरे बीज गै रौंह्दे हे। इसदे अलावा, एस. नियंत्रण पौधें गी बी इस चाल्लीं जख्मी कीता गेआ हा ते बराबर मात्रा (0.5 ग्राम) बाँझ, बिना उपनिवेशित चोकर दे मिश्रण गी जख्म च रक्खेआ गेआ हा ते उच्च नमी दे हेठ रक्खेआ गेआ हा तां जे रोग दे विकास आस्तै वातावरण दा अनुकरण कीता जाई सकै ते इलाज दे समूहें च स्थिरता सुनिश्चित कीती जाई सकै
इलाज दी विधि : बीएं दे पौधें गी 500 मिलीलीटर एल-ओर्निथिन (250 मिलिग्राम/लीटर) जां कवकनाशक रिज़ोलेक्स-टी (50 मिलीग्राम/लीटर) दे जलीय घोल कन्नै मिट्टी गी सिंचाई करियै पानी दित्ता गेआ हा, उसदे बाद 10 दिनें दे अंतराल पर त्रै बारी इलाज कीता गेआ हा प्लेसबो कन्नै इलाज कीते गेदे नियंत्रण गी 500 मिलीलीटर बाँझ आसुत पानी कन्नै सिंचाई कीती गेई। सारे इलाज ग्रीनहाउस दी स्थिति च (25 ± 2°C, 75 ± 1% सापेक्ष आर्द्रता, ते 8 घैंटें दी रोशनी/16 घैंटें दा अंधेरा) कीता गेआ हा। सब्भै बर्तनें गी पखवाड़े च पानी दित्ता गेआ हा ते हर म्हीने संतुलित एनपीके खाद (20-20-20, 3.6% सल्फर ते टीई माइक्रोएलिमेंट्स कन्नै; जैन बीऽ, मिस्र) कन्नै 3-4 ग्राम/लीटर दी सांद्रता च विशिश्ट किस्म आस्तै सिफारिशें ते निर्माता दे निर्देशें दे अनुसार पत्तियें दे छिड़काव कन्नै इलाज कीता जंदा हा जदूं तकर एह् नेईं दस्सेआ गेआ ऐ, तां पूरी चाल्लीं विस्तारित परिपक्व पत्तें (ऊपर थमां 2 ते 3 पत्तियां) गी 72 घैंटें दे बाद इलाज (एचपीटी) पर इकट्ठा करियै, समरूप, पूल ते -80 डिग्री सेल्सियस पर होर विश्लेषणें आस्तै संग्रहीत कीता गेआ, जिंदे च, पर एह्दे तगर सीमित नेईं, आक्सीडेटिव तनाव संकेतकें दा इन सिटु हिस्टोकेमिकल लोकलाइजेशन, लिपिड पेरोक्साइडेशन, एन्जाइमेटिक ते गैर-एन्जाइमेटिक शामल न एंटीऑक्सीडेंट ते जीन अभिव्यक्ति।
सफेद फफूंदी दी संक्रमण दी तीव्रता दा आकलन टीकाकरण दे बाद 21 दिनें (डीपीआई) च हर हफ्ते 1-9 (पूरक तालिका S2) दे पैमाने दा उपयोग करियै कीता गेआ हा जेह्ड़ा टेरन एट अल द्वारा संशोधित पेत्ज़ोल्ड ते डिक्सन पैमाने (1996) दे आधार उप्पर कीता गेआ हा। (2006) ने दी। संक्षेप च, इंटरनोड्स ते नोड्स दे कन्नै-कन्नै घावें दी प्रगति दा पालन करने आस्तै टीकाकरण दे बिंदु थमां शुरू करियै बीएं दे पौधें दे तना ते शाखाएं दी जांच कीती गेई । इसदे बाद टीकाकरण दे बिंदु थमां घाव दी दूरी गी तना जां शाखा दे कन्नै-कन्नै दूरस्थ बिंदु तगर मापा गेआ ते घाव दे स्थान दे आधार उप्पर 1-9 दा स्कोर दित्ता गेआ, जित्थें (1) टीकाकरण दे बिंदु दे कोल कोई दिक्खने आह्ला संक्रमण नेईं हा ते (2-9) घाव दे आकार च धीरे-धीरे बधाऽ ते नोड्स/इंटरनोड्स दे कन्नै-कन्नै प्रगति दा संकेत दित्ता गेआ (पूरक तालिका S2) इसदे बाद सफेद फफूंदी दे संक्रमण दी तीव्रता गी सूत्र 2 दा उपयोग करियै प्रतिशत च बदलेआ गेआ:
इसदे अलावा, रोग प्रगति वक्र (एयूडीपीसी) दे हेठले क्षेत्र दी गणना सूत्र (शेनर ते फिनी, 1977) दा उपयोग करियै कीती गेई ही, जेह् ड़ा हाल च समीकरण 3 दा उपयोग करियै आम बीन दे सफेद सड़ने आस्तै अनुकूलित कीता गेआ हा (चौहान एट अल., 2020) :
जित्थें Yi = समें ti पर बीमारी दी गंभीरता, Yi+1 = अगली बारी ti+1 पर बीमारी दी गंभीरता, ti = पैह्ले मापने दा समां (दिनें च), ti+1 = अगले मापने दा समां (दिनें च), n = समें बिंदुएं जां अवलोकन बिंदुएं दी कुल संख्या। सब्भै जैविक प्रतिलिपिएं च 21 दिनें तगर पौधें दी ऊंचाई (सेमी), हर पौधे च शाखाएं दी संख्या, ते प्रति पौधे दे पत्तें दी संख्या समेत बीन पौधें दे विकास दे पैरामीटर गी हर हफ्ते दर्ज कीता गेआ।
हर जैविक प्रतिकृति च, इलाज दे बाद 45 दिनें (पिछले इलाज दे बाद 15 दिनें बाद) पत्तें दे नमूने (ऊपर थमां दूआ ते त्रीया पूरी चाल्लीं विकसित पत्तियां) इकट्ठे कीते गे । हर जैविक प्रतिकृति च पंज गमले (प्रति गमले च दो पौधे) होंदे हे। कुचल ऊतक दे लगभग 500 मिलिग्राम दा उपयोग प्रकाश संश्लेषण रंजक (क्लोरोफिल ए, क्लोरोफिल बी ते कैरोटीनॉइड) दे निष्कर्षण आस्तै कीता गेआ हा, जिस च 80% एसीटोन दा उपयोग 4 डिग्री सेल्सियस पर न्हेरे च कीता गेआ हा। 24 घैंटें दे बाद नमूनें गी सेंट्रीफ्यूज कीता गेआ ते त्रै बक्ख-बक्ख तरंगदैह् क पर अवशोषण गी मापने कन्नै (लिक्टेनथालर, 1987) दी विधि दे अनुसार यूवी-160ए स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (शिमाज़ू कारपोरेशन, जापान) दा उपयोग करियै क्लोरोफिल ए, क्लोरोफिल बी ते कैरोटीनॉइड सामग्री दे निर्धारण आस्तै सुपरनेटेंट गी इकट्ठा कीता गेआ (ए 470, ए 646 ते ए 663 एनएम)। आखरी च, प्रकाश संश्लेषण रंजक दी सामग्री दी गणना लिक्टेनथालर (1987) आसेआ वर्णत निम्नलिखित सूत्रें 4-6 दा उपयोग करियै कीती गेई।
72 घैंटें दे बाद (hpt) हाइड्रोजन पेरोक्साइड (H2O2) ते सुपरऑक्साइड आयन (O2•−) दे इन सिटु हिस्टोकेमिकल लोकलाइजेशन आस्तै हर जैविक प्रतिकृति थमां पत्तें (ऊपर थमां दूआ ते त्रीया पूरी चाल्लीं विकसित पत्तियां) इकट्ठे कीते गे हर जैविक प्रतिकृति च पंज गमले (प्रति गमले च दो पौधे) होंदे हे। हर इक जैविक प्रतिकृति दा विश्लेषण डुप्लिकेट (दो तकनीकी प्रतिकृति) च कीता गेआ तां जे इस पद्धति दी सटीकता, विश्वसनीयता ते प्रजनन क्षमता गी सुनिश्चित कीता जाई सकै। H2O2 ते O2•− गी क्रमशः 0.1% 3,3′-डायमिनोबेन्जिडीन (DAB; सिग्मा-एल्ड्रिच, डार्मस्टैड, जर्मनी) जां नाइट्रोब्लू टेट्राजोलियम (एनबीटी; सिग्मा-एल्ड्रिच, डार्मस्टैड, जर्मनी) दा उपयोग करदे होई, रोमेरो-प्यूर्टस एट अल द्वारा वर्णत तरीकें दा पालन करदे होई निर्धारत कीता गेआ। (2004) ते एडम एट अल। (1989) च मामूली संशोधनें कन्नै। H2O2 दे हिस्टोकेमिकल लोकलाइजेशन आस्तै, पत्रक गी 10 मिमी ट्राइस बफर (पीएच 7.8) च 0.1% डीएबी कन्नै वैक्यूम घुसपैठ कीता गेआ ते उसदे बाद कमरे दे तापमान पर 60 मिंट तगर रोशनी च इन्क्यूब कीता गेआ। पत्रक गी 4:1 (v/v) टीसीए च 4:1 (v/v) इथानॉल:क्लोरोफॉर्म (अल-गोमहोरिया फार्मास्यूटिकल्स एंड मेडिकल सप्लाईज, काहिरा, मिस्र) च ब्लीच कीता गेआ ते फिर रोशनी च उजागर कीता गेआ, जदूं तकर ओह न्हेरे नेईं होई जंदे। इसी तरह, वाल्व गी 10 मिमी पोटैशियम फास्फेट बफर (पीएच 7.8) कन्नै वैक्यूम घुसपैठ कीता गेआ हा जिस च 0.1 w/v % HBT युक्त O2•− दे हिस्टोकेमिकल लोकलाइजेशन आस्तै स्थान पर हा। पत्रिकाएं गी कमरे दे तापमान पर रोशनी च 20 मिंट तगर इन्क्यूब कीता गेआ, फिर उप्पर दित्ते गेदे तरीके कन्नै ब्लीच कीता गेआ, ते फिर उसलै तकर रोशन कीता गेआ जिसलै तकर गहरे नीले/बैंगनी रंग दे धब्बे नेईं दिक्खे गे। नतीजे च भूरे (H2O2 संकेतक दे रूप च) जां नीले-बैंगनी (O2•− संकेतक दे रूप च) रंग दी तीव्रता दा आकलन छवि प्रसंस्करण पैकेज ImageJ (http://fiji.sc; एक्सेस कीता गेआ 7 मार्च 2024) दे फिजी संस्करण दा उपयोग करियै कीता गेआ।
मैलोनडाइएल्डीहाइड (एमडीए; लिपिड पेरोक्साइडेशन दे निशान दे रूप च) गी डू ते ब्रैमलेज (1992) दी विधि दे अनुसार मामूली संशोधन कन्नै निर्धारत कीता गेआ। हर जैविक प्रतिकृति (ऊपर थमां दूआ ते त्रीया पूरी चाल्लीं विकसित पत्तियां) थमां 72 घैंटें बाद इलाज दे बाद (एचपीटी) इकट्ठे कीते गे । हर जैविक प्रतिकृति च पंज गमले (प्रति गमले च दो पौधे) शामल हे। हर इक जैविक प्रतिकृति दा विश्लेषण डुप्लिकेट (दो तकनीकी प्रतिकृति) च कीता गेआ तां जे इस पद्धति दी सटीकता, विश्वसनीयता ते प्रजनन क्षमता गी सुनिश्चित कीता जाई सकै। संक्षेप च, 0.5 ग्राम पीसे दे पत्ती दे ऊतक दा इस्तेमाल 20% ट्राइक्लोरोएसिटिक एसिड (टीसीए; मिलिपोरेसिग्मा, बर्लिंगटन, एमए, यूएसए) कन्नै कीता गेआ हा, जिस च 0.01% ब्यूटाइल हाइड्रोक्सीटोलूइन (बीएचटी; सिग्मा-एल्ड्रिच, सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) हा। इसदे बाद सुपरनेटेंट च एमडीए दी सामग्री गी यूवी-160ए स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (शिमाजु कारपोरेशन, जापान) दा उपयोग करियै 532 ते 600 एनएम पर अवशोषण गी मापने कन्नै कलरमेट्रिक तरीके कन्नै निर्धारत कीता गेआ ते उसदे बाद एनएमओएल जी−1 एफडब्ल्यू दे रूप च व्यक्त कीता गेआ।
गैर-एन्जाइमिक ते एन्जाइमिक एंटीऑक्सीडेंट दे आकलन लेई, हर जैविक प्रतिकृति थमां 72 घैंटें बाद इलाज (एचपीटी) च पत्तें (ऊपर थमां दूआ ते त्रीया पूरी चाल्लीं विकसित पत्तियां) इकट्ठे कीते गे । हर जैविक प्रतिकृति च पंज गमले (प्रति गमले च दो पौधे) होंदे हे। हर इक जैविक नमूने दा विश्लेषण डुप्लिकेट (दो तकनीकी नमूने) च कीता गेआ। दो पत्तें गी तरल नाइट्रोजन कन्नै पीसिये एन्जाइमी ते गैर-एंजाइमी एंटीऑक्सीडेंट, कुल अमीनो एसिड, प्रोलाइन सामग्री, जीन अभिव्यक्ति, ते आक्सीलेट मात्रा निर्धारण आस्तै सीधे इस्तेमाल कीता गेआ।
कुल घुलनशील फिनोलिकें गी काहकोनेन एट अल द्वारा वर्णत विधि च मामूली संशोधन कन्नै फोलिन-सियोकैल्ट्यू अभिकर्मक (सिग्मा-एल्ड्रिच, सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) दा उपयोग करियै निर्धारत कीता गेआ। (1999) ने दी। संक्षेप च, लगभग 0.1 ग्राम समरूप पत्ती दे ऊतक गी 20 मिलीलीटर 80% मिथानल कन्नै 24 घैंटें तगर न्हेरे च कड्ढेआ गेआ ते सुपरनेटेंट गी सेंट्रीफ्यूजेशन दे बाद इकट्ठा कीता गेआ। नमूने दे अर्क दे 0.1 मिलीलीटर गी 0.5 मिलीलीटर फोलिन-सियोकैल्ट्यू अभिकर्मक (10%) कन्नै मिलाइयै 30 s तगर हिलाया गेआ ते 5 मिंट तगर न्हेरे च छोड़ी दित्ता गेआ। फिर हर ट्यूब च 0.5 मिलीलीटर 20% सोडियम कार्बोनेट घोल (Na2CO3; अल-गोमहोरिया फार्मास्यूटिकल्स एंड मेडिकल सप्लाईज कंपनी, काहिरा, मिस्र) गी मिलाइयै, पूरी चाल्लीं मिलाइयै कमरे दे तापमान पर न्हेरे च 1 घैंटें तगर इन्क्यूब कीता गेआ। ऊष्मायन दे बाद, रिएक्शन मिश्रण दी अवशोषण गी यूवी-160ए स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (शिमाज़ू कारपोरेशन, जापान) दा उपयोग करियै 765 एनएम पर मापा गेआ। नमूनें दे अर्क च कुल घुलनशील फिनोल दी सांद्रता गी गैलिक एसिड कैलिब्रेशन वक्र (फिशर साइंटिफिक, हैम्पटन, एनएच, यूएसए) दा उपयोग करियै निर्धारत कीता गेआ हा ते ताजा वजन दे प्रति ग्राम गैलिक एसिड समतुल्य मिलीग्राम (मिलीग्राम जीएई जी-1 ताजा वजन) दे रूप च दर्शाया गेआ हा।
कुल घुलनशील फ्लेवोनोइड सामग्री गी Djeridane एट अल दी विधि दे अनुसार निर्धारत कीता गेआ। (2006) च मामूली संशोधनें कन्नै कीता गेआ ऐ। संक्षेप च, 0.3 मिलीलीटर उपर्युक्त मेथानॉल अर्क गी 0.3 मिलीलीटर 5% एल्यूमीनियम क्लोराइड घोल (AlCl3; फिशर साइंटिफिक, हैम्पटन, एनएच, यूएसए) कन्नै मिलाइयै, जोरदार तरीके कन्नै हलचल कीता गेआ ते फिर कमरे दे तापमान पर 5 मिंट तगर इन्क्यूब कीता गेआ, जिसदे बाद 0.3 मिलीलीटर 10% पोटैशियम एसीटेट घोल (Al-Gomhoria) मिलाया गेआ दवा ते चिकित्सा आपूर्ति, काहिरा, मिस्र), पूरी चाल्लीं मिलाइयै ते कमरे दे तापमान पर 30 मिंट तगर न्हेरे च इन्क्यूब कीता गेआ। ऊष्मायन दे बाद, रिएक्शन मिश्रण दी अवशोषण गी यूवी-160ए स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (शिमाज़ू कारपोरेशन, जापान) दा उपयोग करियै 430 एनएम पर मापा गेआ। नमूनें दे अर्क च कुल घुलनशील फ्लेवोनोइड्स दी सांद्रता गी रूटिन कैलिब्रेशन कर्व (टीसीआई अमेरिका, पोर्टलैंड, ओआर, यूएसए) दा उपयोग करियै निर्धारत कीता गेआ हा ते उसदे बाद ताजा वजन दे प्रति ग्राम (मिलीग्राम आरई जी-1 ताजा वजन) दे रूप च दर्शाया गेआ हा।
बीएं दे पत्तें च कुल मुक्त अमीनो एसिड सामग्री दा निर्धारण योकोयामा ते हिरामात्सु (2003) आसेआ प्रस्तावित विधि दे आधार उप्पर संशोधित निनहाइड्रीन अभिकर्मक (थर्मो साइंटिफिक केमिकल, वाल्थम, एमए, यूएसए) दा उपयोग करियै कीता गेआ हा ते सन एट अल द्वारा संशोधित कीता गेआ हा। (2006) ने दी। संक्षेप च, 0.1 ग्राम पिसे दे ऊतक गी पीएच 5.4 बफर कन्नै कड्ढेआ गेआ, ते 200 μL सुपरनेटेंट गी 200 μL निनहाइड्रीन (2%) ते 200 μL पाइरिडीन (10%; स्पेक्ट्रम केमिकल, न्यू ब्रंसविक, एनजे, यूएसए) कन्नै रिएक्शन कीता गेआ, उबलदे पानी दे स्नान च 30 मिंट तगर इन्क्यूब कीता गेआ, फिर ठंडा कीता गेआ ते मापा गेआ 580 एनएम यूवी-160ए स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (शिमाज़ू कारपोरेशन, जापान) दा उपयोग करदे होई। दूई बक्खी, प्रोलाइन दा निर्धारण बेट्स विधि कन्नै कीता गेआ (बेट्स एट अल., 1973)। प्रोलाइन गी 3% सल्फोसैलिसिलिक एसिड (थर्मो साइंटिफिक केमिकल, वाल्थम, एमए, यूएसए) कन्नै कड्ढेआ गेआ ते सेंट्रीफ्यूजेशन दे बाद 0.5 मिलीलीटर सुपरनेटेंट गी 1 मिलीलीटर ग्लेशियल एसिटिक एसिड (फिशर साइंटिफिक, हैम्पटन, एनएच, यूएसए) ते निनहाइड्रीन अभिकर्मक कन्नै मिलाया गेआ, 90 डिग्री सेल्सियस पर 45 मिंट तगर इन्क्यूब कीता गेआ, ठंडा कीता गेआ ते मापा गेआ 520 एनएम उप्पर दित्ते गेदे समान स्पेक्ट्रोफोटोमीटर दा उपयोग करदे होई। पत्ती दे अर्क च कुल मुक्त अमीनो एसिड ते प्रोलाइन गी क्रमशः ग्लाइसिन ते प्रोलाइन कैलिब्रेशन वक्र (सिग्मा-एल्ड्रिच, सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) दा उपयोग करियै निर्धारत कीता गेआ हा ते मिलीग्राम/जी ताजा वजन दे रूप च व्यक्त कीता गेआ हा।
एंटीऑक्सीडेंट एन्जाइमें दी एन्जाइमिक गतिविधि गी निर्धारत करने आस्तै, लगभग 500 मिलीग्राम समरूप ऊतक गी 3 मिलीलीटर 50 मिमी ट्राइस बफर (पीएच 7.8) कन्नै कड्ढेआ गेआ जिस च 1 मिमी ईडीटीए-एनए2 (सिग्मा-एल्ड्रिच, सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) ते 7.5% पॉलीविनाइलपाइरोलिडोन (पीवीपी; सिग्मा-एल्ड्रिच, सेंट लुइस, एमओ, यूएसए), प्रशीतन (4 डिग्री सेल्सियस) दे हेठ 20 मिंट तगर 10,000 × जी पर सेंट्रीफ्यूज कीता गेआ, ते सुपरनेटेंट (कच्चे एन्जाइम अर्क) गी इकट्ठा कीता गेआ (एल-नगर एट अल., 2023; उस्मान एट अल., 2023)। इसदे बाद कैटालेज (CAT) गी 2 मिलीलीटर 0.1 एम सोडियम फास्फेट बफर (पीएच 6.5; सिग्मा-एल्ड्रिच, सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) ते 100 μl 269 एमएम H2O2 घोल कन्नै प्रतिक्रिया करियै एबी (1984) दी विधि दे अनुसार इसदी एंजाइमी गतिविधि गी मामूली संशोधनें कन्नै (El-Nagar et al., 2023; उस्मान एट अल।, 2023)। गुआइकोल-निर्भर पेरोक्साइडेज (पीओएक्स) एन्जाइमिक गतिविधि दा निर्धारण हर्राच एट अल दी विधि कन्नै कीता गेआ। (2009) ने दी। (2008)। यूएसए) ते 100 μl 12 मिमी H2O2। इस पद्धति गी (एल-नगर एट अल., 2023; उस्मान एट अल., 2023) थमां थोड़ा संशोधित कीता गेआ। परीक्षण 0.1 एम फास्फेट बफर (पीएच 6.0) च ताजा तैयार कीते गेदे 3 मिलीलीटर कैटेकोल घोल (थर्मो साइंटिफिक केमिकल, वाल्थम, एमए, यूएसए) (0.01 एम) कन्नै प्रतिक्रिया दे बाद कीता गेआ। CAT गतिविधि गी 240 एनएम (A240) पर H2O2 दे अपघटन दी निगरानी करियै मापा गेआ हा, POX गतिविधि गी 436 एनएम (A436) पर अवशोषण च वृद्धि दी निगरानी कन्नै मापा गेआ हा, ते पीपीओ गतिविधि गी हर 30 s पर हर 30 s पर 3 मिंटें लेई UV-160A दा उपयोग करियै अवशोषण च उतार-चढ़ाव रिकार्ड करियै मापा गेआ हा स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (शिमाज़ू, जापान)।
रियल-टाइम आरटी-पीसीआर दा इस्तेमाल त्रै एंटीऑक्सीडेंट कन्नै सरबंधत जीन दे ट्रांसस्क्रिप्ट दे स्तर दा पता लाने लेई कीता गेआ, जिंदे च पेरोक्सिसोमल कैटालेज (PvCAT1; GenBank Accession No. KF033307.1), सुपरऑक्साइड डिस्मुटेज (PvSOD; GenBank Accession No. XM_068639556.1), ते ग्लूटाथियोन रिडक्टेज (PvGR; GenBank Accession No. KY195009.1), बीएं दे पत्तें च (ऊपर थमां दूआ ते त्रीया पूरी चाल्लीं विकसित पत्तियां) पिछले इलाज दे 72 घैंटें बाद । संक्षेप च, निर्माता दे प्रोटोकॉल दे अनुसार सिम्पली पी टोटल आरएनए निष्कर्षण किट (कैट. नंबर बीएससी52एस1; बायोफ्लक्स, बायोरी टेक्नोलॉजी, चीन) दा उपयोग करियै आरएनए गी अलग कीता गेआ। फिर, निर्माता दे निर्देशें दे अनुसार TOP scriptTM cDNA Synthesis Kit दा उपयोग करियै cDNA दा संश्लेषण कीता गेआ। उपर्युक्त त्रै जीन दे प्राइमर अनुक्रम गी पूरक तालिका S3 च दित्ता गेआ ऐ । PvActin-3 (GenBank accession number: XM_068616709.1) गी हाउसकीपिंग जीन दे रूप च इस्तेमाल कीता गेआ ते सापेक्ष जीन अभिव्यक्ति दी गणना 2-ΔΔCT विधि दा उपयोग करियै कीती गेई (लिवाक ते श्मिटजेन, 2001)। जैविक तनाव (सामान्य फलियां ते एंथ्राक्नोज कवक कोलेटोट्रिकम लिंडेमुथियनम दे बश्कार असंगत परस्पर क्रिया) ते अजैविक तनाव (सूखा, लवणता, घट्ट तापमान) दे हेठ एक्टिन स्थिरता दा प्रदर्शन कीता गेआ (Borges et al., 2012)
अस शुरू च प्रोटीन-प्रोटीन ब्लास्ट उपकरण (BLASTp 2.15.0+) (BLASTp 2.15.0+) दा उपयोग करदे होई एस स्क्लेरोटियोरम च ऑक्सालोएसीटेट एसिटाइलहाइड्रोलेज (ओएएच) प्रोटीन दा जीनोम-व्यापी सिलिको विश्लेषण कीता (Altschul et al., 1997, 2005)। संक्षेप च, असें एस्परजिलस फिजीएंसिस सीबीएस 313.89 (AfOAH; टैक्साइड: 1191702; जेनबैंक एक्सेसन नंबर एक्सपी_040799428.1; 342 अमीनो एसिड) ते पेनिसिलियम लागेना (PlOAH; टैक्साइड: 94218; जेनबैंक एक्सेसन नंबर) थमां ओएएच दा इस्तेमाल कीता XP_056833920.1; BLASTp गी नेशनल सेंटर फार बायोटेक्नोलॉजी इन्फॉर्मेशन (एनसीबीआई) दी वेबसाइट, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/ पर जेनबैंक च सबनें थमां हालिया उपलब्ध एस.
इसदे अलावा, एस स्क्लेरोटियोरम (SsOAH) थमां अनुमानित ओएएच जीन ते ए.फिजिएंसिस सीबीएस 313.89 थमां AfOAH दे विकासात्मक विश्लेषण ते फाईलोजेनेटिक बूह्टे दा अनुमान MEGA11 (Tamura et al., 2021) ते JTT मैट्रिक्स-आधारत मॉडल (Jones et al., 2021) च मती संभावना पद्धति दा उपयोग करियै कीता गेआ अल., 1992) च। वंशानुगत पेड़ गी एस स्क्लेरोटियोरम थमां सारे अनुमानित ओएएच जीन (SsOAH) दे प्रोटीन अनुक्रमें दे बहुसंरेखण विश्लेषण ते बाधा-आधारित संरेखण उपकरण (COBALT; https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/cobalt/re_cobalt.cgi) (Papadopoulos ते Agarwala, 2007 च)। इसदे अलावा, एस. https://espript.ibcp.fr/ईएसप्रिप्ट/ईएसप्रिप्ट/इंडैक्स.पीएचपी)।
इ’नें गै नेईं, एस. आखरी च, अनुमानित एस स्क्लेरोटिओरम SsOAH दी त्रि-आयामी (3D) संरचना मॉडलिंग प्रोटीन होमोलॉजी/एनालॉगी रिकग्निशन इंजन (Phyre2 सर्वर संस्करण 2.0; http://www.sbg.bio.ic.ac.uk/~phyre2/html/page.cgi?id=index) (केली एट अल., 2015) दा उपयोग करियै कीता गेआ ते इसदा इस्तेमाल करियै मान्य कीता गेआ SWISS-MODEL सर्वर (https://swissmodel.expasy.org/) (बियासिनी एट अल., 2014) गी। अनुमानित त्रि-आयामी संरचनाएं (पीडीबी प्रारूप) गी यूसीएसएफ-चाइमेरा पैकेज (संस्करण 1.15; https://www.cgl.ucsf.edu/chimera/ ) (Pettersen et al., 2004) दा उपयोग करियै इंटरएक्टिव रूप कन्नै दिक्खेआ गेआ।
स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरम दे माइसेलियम च ऑक्सालोएसीटेट एसिटाइलहाइड्रोलेज (SsOAH; GenBank एक्सेसन नंबर: XM_001590428.1) दे ट्रांसक्रिप्शनल स्तर दा निर्धारण करने आस्तै मात्रात्मक रियल-टाइम फ्लोरोसेंस पीसीआर दा उपयोग कीता गेआ। संक्षेप च, एस. इसदे बाद कोशिकाएं गी एल-ओर्निथिन ते कवकनाशक रिज़ोलेक्स-टी कन्नै अंतिम आईसी50 सांद्रता (क्रमशः 40 ते 3.2 मिलिग्राम/लीटर) च इलाज कीता गेआ ते उसदे बाद इसी परिस्थितियें च 24 घैंटें होर संस्कार कीता गेआ। ऊष्मायन दे बाद संस्कृतियें गी 2500 आरपीएम पर 5 मिंट तगर सेंट्रीफ्यूज कीता गेआ ते सुपरनेटेंट (फंगल माइसेलियम) गी जीन एक्सप्रेशन विश्लेषण आस्तै इकट्ठा कीता गेआ। इ’यै चाल्लीं संक्रमित पौधें थमां संक्रमण दे बाद 0, 24, 48, 72, 96, ते 120 घैंटें च फंगल माइसेलियम इकट्ठा कीता गेआ हा जेह्ड़े संक्रमित ऊतकें दी सतह उप्पर सफेद फफूंदी ते कपास माइसेलियम बनी गेदे हे फंगल माइसेलियम थमां आरएनए कड्ढेआ गेआ ते उसदे बाद सीडीएनए दा संश्लेषण कीता गेआ जि’यां उप्पर दित्ते गेदे न। SsOAH आस्तै प्राइमर अनुक्रम पूरक तालिका S3 च दित्ते गे न। SsActin (GenBank accession number: XM_001589919.1) गी हाउसकीपिंग जीन दे रूप च इस्तेमाल कीता गेआ हा, ते सापेक्ष जीन अभिव्यक्ति दी गणना 2-ΔΔCT विधि दा उपयोग करियै कीती गेई ही (Livak and Schmittgen, 2001)।
आलू डेक्स्ट्रोज शोरबा (पीडीबी) ते पौधें दे नमूनें च जू ते झांग (2000) दी विधि कन्नै मामूली बदलाव कन्नै ऑक्सालिक एसिड निर्धारत कीता गेआ। संक्षेप च, एस. ऊष्मायन दे बाद फंगल कल्चर गी पैह् ले व्हाटमैन #1 फिल्टर पेपर कन्नै छानने दा कम्म कीता गेआ ते फिर 2500 आरपीएम पर 5 मिंट तगर सेंट्रीफ्यूज कीता गेआ तां जे अवशिष्ट माइसेलियम गी हटाया जाई सकै। सुपरनेटेंट गी इकट्ठा करियै आक्सीलेट दे होर मात्रात्मक निर्धारण आस्तै 4 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत कीता गेआ। पौधें दे नमूनें दी तैयारी आस्तै लगभग 0.1 ग्राम पौधें दे ऊतक दे टुकड़े गी आसुत पानी कन्नै त्रै बारी (हर बारी 2 मिलीलीटर) कड्ढेआ गेआ हा । इसदे बाद नमूनें गी 2500 आरपीएम पर 5 मिंट तगर सेंट्रीफ्यूज कीता गेआ, सुपरनेटेंट गी व्हाटमैन नंबर 1 फिल्टर पेपर दे माध्यम कन्नै सूखी छानने दा कम्म कीता गेआ ते होर विश्लेषण आस्तै इकट्ठा कीता गेआ।
आक्सीलिक एसिड दे मात्रात्मक विश्लेषण आस्तै, प्रतिक्रिया मिश्रण गी ग्लास स्टॉपर ट्यूब च निम्नलिखित क्रम च तैयार कीता गेआ: 0.2 मिलीलीटर नमूना (जां पीडीबी कल्चर छानने जां ओक्सालिक एसिड मानक घोल), 0.11 मिलीलीटर ब्रोमोफिनोल ब्लू (बीपीबी, 1 मिमी; फिशर केमिकल, पिट्सबर्ग, पीए, यूएसए), 0.198 मिलीलीटर 1 एम सल्फ्यूरिक एसिड (H2SO4; अल-गोमहोरिया फार्मास्यूटिकल्स एंड मेडिकल सप्लाईज, काहिरा, मिस्र) ते 0.176 मिलीलीटर 100 मिमी पोटैशियम डाइक्रोमेट (K2Cr2O7; TCI रसायन, पोर्टलैंड, ओआर, यूएसए) दा 0.176 मिलीलीटर, ते उसदे बाद घोल गी आसुत पानी कन्नै 4.8 मिलीलीटर तगर पतला कीता गेआ, जोरदार तरीके कन्नै मिलाया गेआ ते फौरन 60 डिग्री सेल्सियस पानी च रक्खेआ गेआ न्हौना। 10 मिंट दे बाद 0.5 मिलीलीटर सोडियम हाइड्रोक्साइड घोल (NaOH; 0.75 M) मिलाइयै प्रतिक्रिया बंद करी दित्ती गेई। रिएक्शन मिश्रण दी अवशोषण (A600) गी यूवी-160 स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (शिमाज़ू कारपोरेशन, जापान) दा उपयोग करियै 600 एनएम पर मापा गेआ। पीडीबी ते आसुत पानी गी क्रमशः कल्चर छानने ते पौधें दे नमूनें दी मात्रा निर्धारण आस्तै नियंत्रण दे रूप च इस्तेमाल कीता गेआ। संस्कृति छानने च आक्सीलिक एसिड दी सांद्रता, पीडीबी माध्यम दे प्रति मिलीलीटर आक्सीलिक एसिड दे माइक्रोग्राम (μg.mL−1) दे रूप च व्यक्त कीती गेई, ते पत्ती दे अर्क च, ऑक्सालिक एसिड दे माइक्रोग्राम प्रति ग्राम ताजा वजन (μg.g−1 FW) दे रूप च व्यक्त कीती गेई, इक ऑक्सालिक एसिड कैलिब्रेशन वक्र (थर्मो फिशर साइंटिफिक केमिकल, वाल्थम, एमए, 1) दा उपयोग करियै निर्धारत कीता गेआ। यूएसए)।
पूरे अध्ययन च सब्भै प्रयोगें गी पूरी चाल्लीं बेतरतीब डिजाइन (सीआरडी) च डिजाइन कीता गेआ हा जेह्दे च हर इलाज च छह जैविक प्रतिकृति ते हर जैविक प्रतिकृति (प्रति गमले च दो पौधे) पंज गमले होंदे न जदूं तकर एह् नेईं दस्सेआ गेआ होए जैविक प्रतिकृतियें दा विश्लेषण डुप्लिकेट (दो तकनीकी प्रतिकृतियें) च कीता गेआ। तकनीकी प्रतिकृतियें दा इस्तेमाल उस्सै प्रयोग दी प्रजनन क्षमता दी जांच करने लेई कीता गेआ हा पर फर्जी प्रतिकृतियें थमां बचने आस्तै सांख्यिक विश्लेषण च इसदा इस्तेमाल नेईं कीता गेआ। डेटा दा सांख्यिकीय विश्लेषण विचरण विश्लेषण (एनओवीए) दा उपयोग करदे होई कीता गेआ ते उसदे बाद ट्यूकी-क्रामर ईमानदारी कन्नै महत्वपूर्ण अंतर (एचएसडी) परीक्षण (पी ≤ 0.05) दा उपयोग कीता गेआ। इन विट्रो प्रयोगें लेई, प्रोबिट मॉडल दा उपयोग करियै IC50 ते IC99 मूल्यें दी गणना कीती गेई ते 95% विश् वास अंतराल दी गणना कीती गेई।
मिस्र दे एल गबिया गवर्नमेंट च बक्ख-बक्ख सोयाबीन खेतरें थमां कुल चार आइसोलेट इकट्ठे कीते गे। पीडीए माध्यम पर, सारे आइसोलेटें च मलाईदार सफेद माइसेलियम पैदा होंदा ऐ जेह्ड़ा जल्दी गै कपास दा सफेद होई जंदा ऐ (चित्र 1 ए) ते फिर स्क्लेरोटियम दे चरण च बेज जां भूरे रंग दा होंदा ऐ । स्क्लेरोटिया आमतौर उप्पर घट्ट, काले, गोलाकार जां अनियमित आकार च होंदे न, 5.2 थमां 7.7 मिमी लम्मे ते 3.4 थमां 5.3 मिमी व्यास होंदे न (चित्र 1 बी) । हालांकि चार आइसोलेटें च 25 ± 2 डिग्री सेल्सियस पर 10-12 दिनें दे ऊष्मायन दे बाद कल्चर मीडियम दे किनारे पर स्क्लेरोटिया दा सीमांत पैटर्न विकसित होआ (चित्र 1 ए), पर प्रति प्लेट स्क्लेरोटिया दी संख्या उंदे च काफी बक्ख-बक्ख ही (P < 0.001), जिस च आइसोलेट 3 च स्क्लेरोटिया दी सारें शा मती संख्या (32.33 ± 1.53 स्क्लेरोटिया प्रति) ही प्लेट 1 सी)। इसी तरह, आइसोलेट #3 ने पीडीबी च होर आइसोलेटें दी तुलना च मता ऑक्सालिक एसिड पैदा कीता (3.33 ± 0.49 μg.mL−1; चित्रा 1 डी)। आइसोलेट #3 ने फाइटोपैथोजेनिक कवक स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटियोरम दी ठेठ रूपात्मक ते सूक्ष्म विशेषताएं गी दस्सेआ। मसाल आस्तै, पीडीए पर, आइसोलेट #3 दी कालोनियां तेजी कन्नै बधी गेइयां, मलाईदार सफेद (चित्र 1 ए), रिवर्स बेज जां हल्के सामन पीले-भूरे रंग दे हे, ते 9 सेमी व्यास दी प्लेट दी सतह गी पूरी चाल्लीं ढकने आस्तै 25 ± 2 डिग्री सेल्सियस पर 6-7 दिनें दी लोड़ होंदी ही उपर्युक्त रूपात्मक ते सूक्ष्म विशेषताएं दे आधार उप्पर आइसोलेट #3 दी पन्छान स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटियोरम दे रूप च कीती गेई।
चित्र 1. आम फलियां फसलें थमां अलग कीते गेदे एस. (ए) पीडीए माध्यम पर चार एस स्क्लेरोटियोरम आइसोलेटें दी माइसेलियम वृद्धि, (बी) चार एस स्क्लेरोटियोरम आइसोलेटें दी स्क्लेरोटिया, (सी) स्क्लेरोटिया दी संख्या (प्रति प्लेट), (डी) पीडीबी माध्यम पर ओक्सालिक एसिड स्राव (μg.mL−1), ते (ई) संवेदनशील व्यावसायिक फलियां पर चार एस स्क्लेरोटियोरम आइसोलेटें दी बीमारी दी गंभीरता (%) ग्रीनहाउस दी स्थिति च गिज़ा 3 दी प्रजाति। मूल्य पंज जैविक प्रतिकृतियें (n = 5) दे औसत ± एसडी दा प्रतिनिधित्व करदे न। बक्ख-बक्ख अक्षर इलाजें दे बश्कार सांख्यिक रूप कन्नै महत्वपूर्ण अंतर गी दर्शांदे न (p < 0.05)। (F–H) आइसोलेट #3 (dpi) कन्नै टीकाकरण दे 10 दिनें बाद क्रमशः जमीन दे उप्परले तने ते सिलिकें उप्पर ठेठ सफेद फफूंदी दे लक्षण दिक्खे गे । (I) एस. क्लस्टरिंग लाइनें दे उप्पर दे नंबर क्षेत्र कवरेज (%) गी दर्शांदे न , ते क्लस्टरिंग लाइनें थमां हेठ दित्ते गेदे नंबर शाखा दी लंबाई गी दर्शांदे न ।
इ’नें गै नेईं, रोगजनकता दी पुष्टि करने आस्तै, ग्रीनहाउस दी स्थिति च संवेदनशील व्यावसायिक बीएं दी प्रजाति गीज़ा 3 गी टीकाकरण आस्तै चार प्राप्त एस. हालांकि सारे हासल कीते गेदे फंगल आइसोलेट रोगजनक हे ते हरी बीन (cv. Giza 3) गी संक्रमित करी सकदे हे, जिसदे कारण टीकाकरण दे 10 दिनें बाद (dpi) जमीन दे उप्पर सारे हिस्सें (चित्र 1F) पर, खासतौर उप्पर तना (चित्र 1G) ते फली (चित्र 1H) पर ठेठ सफेद फफूंदी दे लक्षण पैदा होंदे न, पर आइसोलेट 3 दो स्वतंत्र प्रयोगें च सारें शा आक्रामक आइसोलेट हा। आइसोलेट 3 च बीन दे पौधें पर बीमारी दी गंभीरता (%) सारें शा मती ही (संक्रमण दे बाद क्रमशः 7, 14, ते 21 दिनें च 24.0 ± 4.0, 58.0 ± 2.0, ते 76.7 ± 3.1; चित्रा 1F)।
आंतरिक ट्रांसक्रिप्टेड स्पेसर (आईटीएस) अनुक्रमण (चित्र 1I) दे आधार उप्पर सारें शा आक्रामक एस स्क्लेरोटियोरम आइसोलेट #3 दी पन्छान दी होर पुष्टि कीती गेई। आइसोलेट #3 ते 20 संदर्भ आइसोलेट/उपभेदें दे बिच्च वंशानुगत विश्लेषण च उंदे बश्कार उच्च समानता (>99%) दिक्खी गेई। ध्यान देने आह् ला ऐ जे एस OR206374.1; नमें अनुक्रम गी एनसीबीआई डेटाबेस च जमा कीता गेआ ऐ ते इसदा नांऽ “स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटियोरम – आइसोलेट वाईएन-25” (जेनबैंक एक्सेसन नंबर पीवी202792) रखेआ गेआ ऐ। दिक्खेआ जाई सकदा ऐ जे आइसोलेट 3 सारें शा आक्रामक आइसोलेट ऐ; इसलेई इस आइसोलेट गी बाद दे सारे प्रयोगें च अध्ययन आस्तै चुनेआ गेआ।
एस स्क्लेरोटियोरम आइसोलेट 3 दे खिलाफ बक्ख-बक्ख सांद्रता (12.5, 25, 50, 75, 100 ते 125 मिलीग्राम/लीटर) च डायमाइन एल-ओर्निथिन (सिग्मा-एल्ड्रिच, डार्मस्टैड, जर्मनी) दी जीवाणुरोधी गतिविधि दी जांच इन विट्रो च कीती गेई। ध्यान देने आह् ला ऐ जे एल-ओर्निथिन ने जीवाणुरोधी प्रभाव पाया ते धीरे-धीरे खुराक पर निर्भर तरीके कन्नै एस स्क्लेरोटियोरम हाइफे दी रेडियल वृद्धि गी रोकेआ (चित्र 2 ए, बी)। परीक्षण कीती गेई उच्चतम सांद्रता (125 मिलीग्राम/लीटर) च, एल-ओर्निथिन ने उच्चतम माइसेलियम विकास निरोध दर (99.62 ± 0.27%; चित्रा 2 बी) दा प्रदर्शन कीता, जेह्ड़ा परीक्षण कीते गेदे उच्चतम सांद्रता (10 मिलिग्राम/लीटर) च व्यावसायिक कवकनाशक रिज़ोलेक्स-टी (निरोध दर 99.45 ± 0.39%; चित्रा 2C) दे बराबर हा, जेह्ड़ा इसी चाल्ली दा संकेत दिंदा ऐ प्रभावकारिता दी।
चित्र 2. स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटियोरम दे खिलाफ एल-ओर्निथिन दी इन विट्रो जीवाणुरोधी गतिविधि। (ए) एस स्क्लेरोटियोरम दे खिलाफ एल-ओर्निथिन दी बक्ख-बक्ख सांद्रता दी बैक्टीरिया विरोधी गतिविधि दी तुलना व्यावसायिक कवकनाशक रिज़ोलेक्स-टी (10 मिलीग्राम/लीटर) कन्नै करना। (बी, सी) क्रमशः एल-ओर्निथिन (12.5, 25, 50, 75, 100 ते 125 मिलिग्राम/लीटर) जां रिज़ोलेक्स-टी (2, 4, 6, 8 ते 10 मिलीग्राम/लीटर) दी बक्ख-बक्ख सांद्रता दे बाद एस स्क्लेरोटियोरम माइसेलियम दी वृद्धि दी निरोध दर (%)। मूल्य पंज जैविक प्रतिकृतियें (n = 5) दे औसत ± एसडी दा प्रतिनिधित्व करदे न। बक्ख-बक्ख अक्षर इलाजें दे बश्कार सांख्यिक अंतर गी दर्शांदे न (p < 0.05)। (डी, ई) क्रमशः एल-ओर्निथिन ते व्यावसायिक कवकनाशक रिज़ोलेक्स-टी दा प्रोबिट मॉडल रिग्रेशन विश्लेषण। प्रोबिट मॉडल रिग्रेशन रेखा गी ठोस नीली रेखा दे रूप च दस्सेआ गेआ ऐ, ते भरोसेमंद अंतराल (95%) गी डैश लाल रेखा दे रूप च दस्सेआ गेआ ऐ।
इसदे अलावा, प्रोबिट रिग्रेशन विश्लेषण कीता गेआ ते इसदे अनुरूप प्लाट तालिका 1 ते चित्र 2D,E च दित्ते गे न। संक्षेप च, एल-ओर्निथिन दे स्वीकार्य ढलान मूल्य (y = 2.92x − 4.67) ते इस कन्नै जुड़े दे महत्वपूर्ण आंकड़े (Cox & Snell R2 = 0.3709, Nagelkerke R2 = 0.4998 ते p < 0.0001; चित्रा 2D) ने व्यावसायिक कवकनाशक दी तुलना च एस रिजोलेक्स-टी (वाई = 1.96x − 0.99, कॉक्स एंड स्नेल आर 2 = 0.1242, नागेलकेर्के आर 2 = 0.1708 ते पी < 0.0001) (तालिका 1)।
तालिका 1. एस.
कुल मिलाइयै, एल-ओर्निथिन (250 मिलिग्राम/लीटर) ने इलाज कीते गेदे आम बीन पौधें पर सफेद फफूंदी दे विकास ते गंभीरता च काफी कमी कीती ऐ जेह्ड़ी बिना इलाज कीते गेदे एस स्क्लेरोटियोरम-संक्रमित पौधें दी तुलना च (नियंत्रण; चित्रा 3 ए) संक्षेप च, हालांकि बिना इलाज दे संक्रमित नियंत्रण पौधें दी बीमारी दी गंभीरता च धीरे-धीरे बद्धोबद्ध होआ (52.67 ± 1.53, 83.21 ± 2.61, ते 92.33 ± 3.06%), पर एल-ओर्निथिन ने पूरे प्रयोग च बीमारी दी गंभीरता च काफी कमी कीती (%) (8.97 ± 0.15, 18.00 ± 1.00, ते 26.36 ± 3.07) क्रमशः 7, 14, ते 21 दिनें दे बाद (डीपीटी) (चित्र 3 ए) । इ’यै चाल्लीं, जदूं एस रिजोलेक्स-टी कवकनाशक (183.61 ± 7.71; चित्रा 3 बी)। दूजे प्रयोग च बी इयै रुझान दिक्खेआ गेआ।
चित्र 3. ग्रीनहाउस दी स्थिति च स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटियोरम दे कारण आम बीन दे सफेद सड़ने दे विकास पर एल-ओर्निथिन दे बहिर्जात प्रयोग दा प्रभाव। (ए) 250 मिलिग्राम/लीटर एल-ओर्निथिन दे इलाज दे बाद आम बीन दे सफेद सांचे दा रोग प्रगति वक्र। (B) एल-ओर्निथिन कन्नै इलाज दे बाद आम बीन दे सफेद फफूंदी दे रोग प्रगति वक्र (एयूडीपीसी) दे हेठले क्षेत्र। मूल्य पंज जैविक प्रतिकृतियें (n = 5) दे औसत ± एसडी दा प्रतिनिधित्व करदे न। बक्ख-बक्ख अक्षर इलाजें दे बश्कार सांख्यिक रूप कन्नै महत्वपूर्ण अंतर गी दर्शांदे न (p < 0.05)।
250 मिलीग्राम/लीटर एल-ओर्निथिन दे बहिर्जात प्रयोग कन्नै 42 दिनें दे बाद पौधे दी ऊंचाई (चित्र 4 ए), प्रति पौधे शाखाएं दी संख्या (चित्र 4 बी), ते प्रति पौधे दे पत्तें दी संख्या (चित्र 4 सी) च धीरे-धीरे वृद्धि होंदी ऐ । जदके व्यावसायिक कवकनाशक रिज़ोलेक्स-टी (50 मिलीग्राम/लीटर) दा अध्ययन कीते गेदे सारे पोशण पैरामीटर उप्पर सारें शा मता असर पेआ, तां 250 मिलिग्राम/लीटर एल-ओर्निथिन दे बहिर्जात प्रयोग कन्नै बिना इलाज दे नियंत्रणें दी तुलना च दुआ बड्डा असर पेआ (चित्र 4 ए-सी) दूई बक्खी, एल-ओर्निथिन उपचार दा प्रकाश संश्लेषण रंजक क्लोरोफिल ए (चित्र 4 डी) ते क्लोरोफिल बी (चित्र 4 ई) दी सामग्री पर कोई खास असर नेईं पेआ, पर नकारात्मक नियंत्रण (0.44 ± 0.02 मिलीग्राम/ग्राम fr wt) ते कुल कैरोटीनॉइड सामग्री (0.56 ± 0.03 मिलीग्राम/जी fr wt) च थोड़ा बधाया गेआ सकारात्मक नियंत्रण (0.46 ± 0.02 मिलीग्राम / जी एफआर wt; चित्रा 4 एफ)। कुल मिलाइयै, एह् नतीजे इस गल्लै गी दस्सनदे न जे एल-ओर्निथिन इलाज कीते गेदे फलियां आस्तै फाइटोटोक्सिक नेईं ऐ ते उंदी वृद्धि गी बी उत्तेजित करी सकदा ऐ ।
चित्र 4. ग्रीनहाउस दी स्थिति च स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटियोरम कन्नै संक्रमित बीएं दे पत्तें दी वृद्धि विशेषताएं ते प्रकाश संश्लेषण दे प्रभाव उप्पर बहिर्जात एल-ओर्निथिन दे प्रयोग दा प्रभाव । (ए) पौधे दी ऊंचाई (सेमी), (बी) प्रति पौधे शाखाएं दी संख्या, (सी) प्रति पौधे पत्तियें दी संख्या, (डी) क्लोरोफिल ए सामग्री (mg g-1 fr wt), (E) क्लोरोफिल बी सामग्री (mg g-1 fr wt), (F) कुल कैरोटीनॉयड सामग्री (mg g-1 fr wt)। मूल्य पंज जैविक प्रतिकृतियें (n = 5) दा औसत ± एसडी ऐ। बक्ख-बक्ख अक्षर इलाजें दे बश्कार सांख्यिक रूप कन्नै महत्वपूर्ण अंतर गी दर्शांदे न (p < 0.05)।
प्रतिक्रियाशील आक्सीजन प्रजातियें (ROS; हाइड्रोजन पेरोक्साइड [H2O2] दे रूप च व्यक्त कीता गेआ) ते मुक्त कण (सुपरऑक्साइड आयन [O2•−] दे रूप च व्यक्त कीता गेआ) दे इन सिटु हिस्टोकेमिकल लोकलाइजेशन ने पता लाया जे एल-ओर्निथिन (250 मिलीग्राम/लीटर) दे बहिर्जात प्रयोग कन्नै H2O2 (96.05 ± 5.33 nmol.g−1 FW) दे संचय च काफी कमी आई ऐ चित्र 5 ए) ते O2•− (32.69 ± 8.56 एनएमओएल.जी−1 एफडब्ल्यू; चित्रा 5 बी) दोऐ गै बिना इलाज दे संक्रमित पौधें (क्रमशः 173.31 ± 12.06 ते 149.35 ± 7.94 एनएमओएल.जी−1 एफडब्ल्यू) ते 50 मिलीग्राम/लीटर व्यावसायिक कवकनाशक कन्नै इलाज कीते गेदे पौधें दे संचय दी तुलना च रिजोलेक्स-टी (170.12 ± 9.50 ते 157.00 ± 7.81 nmol.g−1 fr wt, क्रमशः) 72 घंटे पर। hpt दे तहत H2O2 ते O2•− दे उच्च स्तर इकट्ठे होए (चित्र 5 ए, बी)। इसी तरह, टीसीए-आधारत मैलोनडायल्डीहाइड (एमडीए) परीक्षण कन्नै पता चलेआ जे एस स्क्लेरोटियोरम कन्नै संक्रमित बीएं दे पौधें च अपने पत्तें च एमडीए (113.48 ± 10.02 nmol.g fr wt) दा उच्च स्तर इकट्ठा होंदा ऐ (चित्र 5 सी)। हालांकि, एल-ओर्निथिन दे बहिर्जात प्रयोग कन्नै लिपिड पेरोक्साइडेशन च काफी कमी आई ऐ जिसदा सबूत इलाज कीते गेदे पौधें च एमडीए दी मात्रा च कमी (33.08 ± 4.00 nmol.g fr wt) ऐ ।
चित्र 5. ग्रीनहाउस दी स्थिति च संक्रमण दे बाद 72 घैंटें च एस. (ए) हाइड्रोजन पेरोक्साइड (H2O2; nmol g−1 FW) 72 hpt पर, (B) सुपरऑक्साइड आयन (O2•−; nmol g−1 FW) 72 hpt पर, (C) malondialdehyde (MDA; nmol g−1 FW) 72 hpt पर, (D) कुल घुलनशील फिनोल (mg GAE g−1 FW) 72 hpt पर, (ई) 72 एचपीटी पर कुल घुलनशील फ्लेवोनोइड (mg RE g−1 FW), (F) 72 hpt पर कुल मुक्त अमीनो एसिड (mg g−1 FW), ते (G) 72 hpt पर प्रोलाइन सामग्री (mg g−1 FW)। मूल्य 5 जैविक प्रतिकृतियें (n = 5) दे औसत ± मानक विचलन (औसत ± एसडी) दा प्रतिनिधित्व करदे न। बक्ख-बक्ख अक्षर इलाजें दे बश्कार सांख्यिक रूप कन्नै महत्वपूर्ण अंतर गी दर्शांदे न (p < 0.05)।